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[发明专利]一种长片段DNA分子结构柔性的表征方法-CN202110333527.6有效
发明人：宋波;吴珍;程时锋 -专利权人：中国农业科学院农业基因组研究所
申请日： 2021-03-29 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12Q1/6855 文献下载
摘要：本发明提供了一种长片段DNA分子结构柔性的表征方法。本发明利用小分子DNA环化效率与其结构柔性正相关的特点，将长片段DNA分子随机打断为短片段DNA后进行环化反应，通过测定其环化效率来对其结构柔性进行判定，进而对长片段DNA结构柔性进行表征。该方法完全摆脱了原子力显微镜的依赖，可以实现快速、高通量的测定，同时有效表征长片段DNA分子结构柔性，结果能够满足科学研究和技术优化等工作需求。
一种片段 dna 分子结构柔性表征方法

[发明专利]一种长片段DNA体外重排的方法-CN201710772171.X在审
发明人：元英进;吴毅;朱瑞莹;马璐;刘瑞 -专利权人：天津大学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2018-01-30 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种长片段DNA体外重排的方法。本发明利用改善的Cre‑LoxP系统的特异性重组技术，大大提高了长片段DNA重排的效率，以数量庞大的长片段DNA发生重排的质粒文库为基础，将质粒文库导入到对应的宿主细胞验证其最佳的表型，进而确定重排后的长片段DNA序列，可以广泛应用于基因重排、文库构建和代谢通路优化领域。
一种片段 dna 体外重排方法

[发明专利]用于长片段阅读测序的方法和组合物-CN201710128962.9在审
发明人： R·德马纳克;B·A·彼得斯;A·亚历克斯埃夫;P·洪 -专利权人：考利达基因组股份有限公司
申请日： 2010-06-15 - 公布日： 2017-10-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及用于长片段阅读测序的方法和组合物。本发明涵盖用于制备基因组DNA的长片段、用于为长片段阅读测序方法加工基因组DNA的方法和组合物及用于加工并分析序列数据的软件和算法。
用于片段阅读方法组合

[发明专利]用于长片段阅读测序的方法和组合物-CN201080036235.6有效
发明人： R.德马纳克;B.A.彼得斯;A.亚历克斯埃夫;P.洪 -专利权人：考利达基因组股份有限公司
申请日： 2010-06-15 - 公布日： 2017-04-05 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及用于长片段阅读测序的方法和组合物。本发明涵盖用于制备基因组DNA的长片段、用于为长片段阅读测序方法加工基因组DNA的方法和组合物及用于加工并分析序列数据的软件和算法。
用于片段阅读方法组合

[发明专利]一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒及方法-CN201310433222.8有效
发明人：刘辉 -专利权人：刘辉
申请日： 2013-09-22 - 公布日： 2013-12-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：所述试剂盒包括检测用引物，即包括：CYP3A4基因第1～3外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第4～7外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第8～11外显子的长片段扩增特异性上下游引物和CYP3A4基因第12～13外显子的长片段扩增特异性上下游引物中的至少一对，以及与所述第1～3外显子的长片段DNA、第4～7外显子的长片段DNA、第8～11外显子的长片段DNA以及第12～13外显子的长片段DNA相对应的CYP3A4基因的各外显子的上下游测序引物中的至少一对。
一种检测 cyp3a4 基因多态性试剂盒方法

[发明专利]一种快速长片段扩增酶及其在KIR基因测序中的应用-CN202210384065.5在审
发明人：陈炤源;王浩;章婷婷;崔江应 -专利权人：江苏伟禾生物科技有限公司
申请日： 2022-04-13 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种快速长片段扩增酶及其在KIR基因测序中的应用。所述的快速长片段扩增酶为经氨基酸序列修饰的可快速扩增长片段的DNA聚合酶，所述的修饰的DNA聚合酶与未修饰的DNA聚合酶的氨基酸序列相比，进行如下突变：第145位的亮氨酸L突变为谷氨酰胺Q，第719位的缬氨酸V突变为天冬酰胺N，所述快速长片段扩增酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 48所示。本发明具有如下技术效果：1）本发明的DNA聚合酶为经氨基酸序列修饰的可快速扩增长片段的DNA聚合酶，能够实现对长片段目的序列的快速准确扩增；可在一个PCR反应实现对KIR亚型基因的全长扩增，长至16kb
一种快速片段扩增及其 kir 基因中的应用

[发明专利]一种复杂长片段核酸序列的扩增技术-CN201811617607.9在审
发明人：曾晓静;李胜;蒋馥蔓;张杰豪;杜伯乐 -专利权人：广州精科医学检验所有限公司
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2019-05-03 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种复杂长片段核酸序列的扩增技术，通过根据目标序列的GC含量设计引物，同时调整引物的Tm值，将复性和延伸操作同时进行，缩减为两步法扩增，提高了复杂长片段核酸序列的扩增成功率，特别是可扩增出二级结构复杂的长片段DNA序列。本发明的扩增方法，使用普通的PCR仪器即可完成，适用于大部分长片段PCR扩增，可以扩增出GC含量高达60％的长片段DNA序列，特异性更强，扩增效率高，操作简单。
扩增长片段核酸序列长片段DNA 引物二级结构含量设计扩增效率目标序列两步法复性成功率延伸

[发明专利]一种长片段DNA文库构建方法-CN201680012412.4有效
发明人：王欧;章文蔚;蒋慧;林霖;常灿坤 -专利权人：深圳华大生命科学研究院;深圳华大基因科技有限公司
申请日： 2016-04-14 - 公布日： 2020-05-05 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：提供了一种长片段DNA文库构建方法，包括如下步骤：1)通过转座酶使长片段DNA断开为大小为3‑10kb的目的片段，再扩增所述目的片段，得到含有dUTP的目的片段扩增产物；2)通过去除所述目的片段扩增产物中的dUTP,使所述目的片段二次片段化为300‑1200bp DNA短片段；3)在所述DNA短片段两端分别连接测序接头单链A和测序接头单链B；得到连接测序接头产物；4)PCR扩增所述连接测序接头产物，得到扩增产物
一种片段 dna 文库构建方法

[发明专利]玻片表面种植长片段DNA的方法-CN202111485777.8在审
发明人：胡岚;许金超;徐鸣 -专利权人：材料科学姑苏实验室;苏州罗岛纳米科技有限公司
申请日： 2021-12-07 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及基因芯片技术领域，特别涉及玻片表面种植长片段DNA的方法。长片段DNA的两端修饰具有操作简单，有效等优点。长片段DNA在醛基玻片表面的种植，具有操作简单，种植密度高，稳定性好等优点，种植的效果如图12所示。
表面种植片段 dna 方法

[发明专利]一种体外合成HBV cccDNA的方法及其应用-CN202310638627.9在审
发明人：蔡雪飞;张津 -专利权人：重庆医科大学
申请日： 2023-05-31 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N15/34 文献下载
摘要：所述方法包括：采用HBV DNA的长片段和短片段，通过体外自组装反应无缝环化组装形成1倍体的HBV cccDNA，所述长片段为L1，所述短片段为S3，或者，所述长片段为L2，所述短片段为S4；所述L1、L2、S3和S4依次为HBV DNA全长片段序列的区间1859nt～1604nt、1580nt～1884nt、2368nt～1700nt和1673nt～2392nt对应的序列。本发明将分段扩增的HBV DNA通过自组装反应进行双片段无缝环化，构建出了1倍体的HBV cccDNA，可应用于临床标本的HBV cccDNA的制备和验证中，为HBV分子机制的研究奠定坚实的基础。
一种体外合成 hbv cccdna 方法及其应用

[发明专利]方便克隆长片段DNA且稳定遗传的质粒及其构建方法和应用-CN201510215582.X有效
发明人：孔庆科;韩月;刘青;赵新新;刘琼;易洁;位玉南 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2015-04-30 - 公布日： 2018-06-05 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了方便克隆长片段DNA且稳定遗传的质粒的构建方法，该方法包括如下步骤：1）扩增带有Sbf I和Not I酶切位点的T1T2‑pSC101‑asd片段；2）扩增带有Sbf I 和Not I酶切位点的TRP1‑ARS4/CEN5‑Spec片段；3）消化步骤1）和2）所得的片段；4）回收T1T2‑pSC101‑asd片段和带有相同黏性末端的TRP1‑ARS4/CEN5‑Spec片段；5）连接步骤4）所得片段；6）将步骤5）所得连接产物转化入DH5α感受态细胞中，过夜培养；7）挑取单菌落培养后，提取质粒，经酶切消化、电泳鉴定后，回收获取重组质粒DNA。本发明还公布了由上述方法得到的质粒及其在同时容纳多个DNA片段用于长片段DNA或基因簇组装并稳定表达的应用。本发明质粒为低拷贝质粒，可实现含长片段DNA的质粒从酵母向原核宿主中转化和稳定表达。
质粒长片段DNA 酶切位点稳定表达稳定遗传构建扩增克隆重组质粒DNA 单菌落培养低拷贝质粒消化黏性电泳鉴定连接产物原核宿主回收基因簇酶切酵母转化应用组装容纳

[发明专利]一种长片段和复杂片段DNA的高效体外合成方法-CN201610649260.0在审
发明人：李阳 -专利权人：武汉伯远生物科技有限公司
申请日： 2016-08-09 - 公布日： 2016-12-14 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提出了一种长片段和复杂片段DNA的高效体外合成方法，通过先用引物合成一级片段，再进行二级片段组装，最后组装成最终的DNA序列。本方法合成的DNA片段具有合成质量稳定，不受DNA复杂性和GC含量干扰，能够合成超长的DNA片段，稳定合成30kb以内的DNA片段，满足了现代分子实验的需求。
一种片段复杂 dna 高效体外合成方法

[发明专利]一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用-CN201810239733.9在审
发明人：吴雅坤;林振华 -专利权人：苏州泰康吉安仪器科技有限公司
申请日： 2018-03-22 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用，可用于cDNA与双链DNA的可控片段化，及其文库的构建。在单链cDNA分子片段化中，通过向合成与RNA模板互补的cDNA链的反转录反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的cDNA；在双链DNA分子的片段化中，通过向合成双链DNA的PCR反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的双链DNA；在所述cDNA与双链DNA上的dU碱基处进行酶处理，断裂DNA分子，生成片段化的cDNA与双链DNA；将片段化的cDNA与双链DNA进行末端补平处理。通过上述方式，本发明能够制备长度可调的片段化DNA，便于提高cDNA与双链DNA文库的建库效率，同时能消除长片段DNA不能有效测通的缺陷，并为长片段DNA序列的拼接提供校正序列。本方法可用于基于DNA扩增反应的测序文库构建。
双链DNA 片段化构建文库可控长片段DNA 碱基可用双链DNA分子片段化DNA 测序文库长度可调单链cDNA 分子片段合成双链断裂DNA 反转录碱基处酶处理补平建库拼接制备校正应用合成

[发明专利]一种动物组织长片段DNA的提取方法及试剂盒-CN201410782386.6在审
发明人：王娟;朱海龙;郭梅 -专利权人：深圳华大基因科技服务有限公司
申请日： 2014-12-16 - 公布日： 2015-04-22 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种动物组织长片段DNA的提取方法，包括以下步骤：1)通过酶消化法对动物组织进行消化，制得细胞悬液；2)通过琼脂糖包埋所述细胞悬液中的细胞，制成胶块，然后在胶块中进行蛋白酶K及RNase酶消化；3)将消化后清洗好的胶块进行溶胶、透析，制得长片段DNA。本发明还公开了一种动物组织长片段DNA的提取试剂盒及其使用方法。本发明的提取方法及试剂盒可克服物种及组织样品的局限性，提取的DNA长度可达2MB以上，能够很好地满足Irys系统或其他酶切图谱对基因组DNA长度的要求。
一种动物组织片段 dna 提取方法试剂盒

[发明专利]一种长片段基因的生物合成方法及应用-CN202210840485.X在审
发明人：逯晓云;张宏宇 -专利权人：天津中合基因科技有限公司
申请日： 2022-07-18 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种长片段基因的生物合成方法及应用。本发明属于DNA合成技术领域，主要涉及一种长片段基因的生物合成方法及应用，包括如下三个步骤：(1)短链寡核苷酸合成：利用末端脱氧核苷酸转移酶合成短链DNA；(2)DNA组装：利用酶促反应将所述短链DNA组装拼接得到长片段DNA；(3)DNA纠错：利用可以识别碱基错配的核酸内切酶和/或错配结合酶进行基因合成错误修复步骤。该方法运用全生物法合成，利用生物酶合成寡核苷酸，不但解决了化学合成短链DNA的成本高、污染大等问题，还进一步解决了传统基因合成方法中短链DNA合成与长链DNA拼接纠错技术不兼容的问题，可应用于现代分子生物学
一种片段基因生物合成方法应用

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